液相色譜系統(tǒng)的許多問(wèn)題都可以在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵所在。

A.峰拖尾

原因：1.篩板阻塞；2.色譜柱塌陷；3.干擾峰；4.流動(dòng)相pH選擇錯(cuò)誤；5.樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)；

解決辦法：1.a.反沖色譜柱；b.更換進(jìn)口篩板；c.更換色譜柱；2.  填充色譜柱；3.a.使用更長(zhǎng)的色譜柱；b.改變流動(dòng)相或更換色譜柱；4.調(diào)整pH值，對(duì)于堿性化合物，低pH值更有利于得到對(duì)稱峰；5.a.加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑。b.更改色譜柱。

B.峰前延

原因：1.柱溫低；2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)；3.樣品過(guò)載；4.色譜柱損壞；

解決辦法：1.升高柱溫；2.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑；3.降低樣品含量；4.見A1、A2；

C.峰分叉

原因：1.保護(hù)柱或分析柱污染；2.樣品溶劑不溶于流動(dòng)相；

解決辦法：1.取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析；如果必要更換保護(hù)柱；如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗；如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧蝗绻麊?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。2.改變樣品溶劑；如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑；

D.峰變形

原因：1.樣品過(guò)載；

解決辦法：1.減少樣品載量；

E．早出的峰變形

原因：1.樣品溶劑選擇不恰當(dāng)；

解決辦法：1.  a.減少進(jìn)樣體積；b.運(yùn)用低極性樣品溶劑；

F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原因：1．柱外效應(yīng)；

解決辦法：1. a.調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）；b.使用小體積的流通池；

G．K’增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重

原因：1.二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式；2.二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式；3.二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)；

解決辦法：1.  a.加入三乙胺（或堿性樣品）；b.加入乙酸（或酸性樣品）；c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）；d.更換一支柱子；2. a.加入三乙胺（或堿性樣品）；b.加入乙酸（或酸性樣品）；c.加入水（或多官能團(tuán)化合物）；d.試用另一種方法；3.加入三乙胺（或堿性樣品）；

H．酸性或堿性化合物的峰拖尾

原因：1.緩沖不合適；

解決辦法：1.a.使用濃度50～100mM的緩沖液；b.使用P ka等于流動(dòng)相pH值的緩沖液；

I．額外的峰

原因：1.樣品中有其他組份；2.前一次進(jìn)樣的洗脫峰；3.空位或鬼峰；

解決辦法：1.正常；2. a.增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率；b.提高流速；3. a.檢查流動(dòng)相是否純凈；b.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑；c.減少進(jìn)樣體積；

J.保留時(shí)間波動(dòng)

原因：1.溫控不當(dāng)；2.流動(dòng)相組分變化；3.色譜柱沒(méi)有平衡；

解決辦法：1.調(diào)好柱溫；2.防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）；3.在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱；

K.保留時(shí)間不斷變化

原因：1.流速變化；2.泵中有氣泡；3.流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)；

解決辦法：1.重新設(shè)定流速；2.從泵中除去氣泡；3. a.更換合適的流動(dòng)相；b.選擇合適的混合流動(dòng)相；

L.基線漂移

原因：1.柱溫波動(dòng)；（即使很小的溫度變化都會(huì)引起基線波動(dòng)；通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器；）2.流動(dòng)相不均勻；（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移）3.流通池被污染或有氣體；4.檢測(cè)器出口阻塞；（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）5.流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化；6.柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)；7.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成；8.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。9.使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。10.檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；

解決辦法：1.控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器；2.使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑；流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣；3.用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池；如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）4.取出阻塞物或更換管子；參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗；5.更改配比或流速；為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速；6.用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10～20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗；7.檢查流動(dòng)相的組成；使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑；8.使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9.重新設(shè)定基線；當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相；10.將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處；

M.基線噪音（規(guī)則的）

原因：1.在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣；2.漏液；3.流動(dòng)相混合不完全；4.溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加熱）；5.在同一條線上有其他電子設(shè)備；6.泵振動(dòng)；

解決辦法：1.流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣；2.見第三部分；檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3.用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑；4.減少差異或加上熱交換器；5.斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正；6.在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。

N.基線噪音（不規(guī)則的）

原因：1.漏液；2.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成；3.流動(dòng)相各溶劑不相溶；4.檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題；5.系統(tǒng)內(nèi)有氣泡；6.檢測(cè)器內(nèi)有氣泡；7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音）；8.檢測(cè)器燈能量不足；9.色譜柱填料流失或阻塞；10.流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常；

解決辦法: 1.見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2.檢查流動(dòng)相的組成；3.選擇互溶的流動(dòng)相；4.斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正；5.用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)；6.清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器；7.用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池；8.更換燈；9.更換色譜柱；10.維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置；

O.寬峰

原因：1.流動(dòng)相組成變化；2.流動(dòng)相流速太低；3.漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間）；4.檢測(cè)器設(shè)定不正確；5.柱外效應(yīng)影響：a.柱子過(guò)載；b.檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大；c.柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大；d.記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)；6.緩沖液濃度太低；7.保護(hù)柱污染或失效；8.色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低；9.柱入口塌陷；10.呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰；11.柱溫過(guò)低；12.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大；

解決辦法：1.重新制備新的流動(dòng)相；2.調(diào)節(jié)流速；3.見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封；4.調(diào)整設(shè)定；5. a.小體積進(jìn)樣（例如：10μl而不是100μl）以1：10或1：100的比例稀釋樣品；b.減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池；c.使用內(nèi)徑為0.007～0.01的短管路；d.減少響應(yīng)時(shí)間；6.增加濃度；7.更換保護(hù)柱；8.更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子；9.打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子；10.選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果；11.提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò)75℃；12.使用較小的時(shí)間常數(shù)；

P.分離度降低

原因：1.流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）；2.保護(hù)柱或分析柱阻塞；

解決辦法：1.重新配置流動(dòng)相；2.去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颉Ｈ绻麊?wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱；

Q.所有的峰面積都太小

原因：1.檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高；2.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大；3.進(jìn)樣量太少；4.記錄儀連接不當(dāng)；

解決辦法：1.減少衰減的設(shè)定；2.設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)；3.增大進(jìn)樣量；4.使用正確的連接；

R.所有峰面積都太大

原因：1.檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低；2.進(jìn)樣過(guò)多；3.記錄儀連接不正確；

解決辦法：1.采取較大的衰減；2.減少進(jìn)樣量；3.正確連接記錄儀。

---本文摘自《實(shí)驗(yàn)與分析》